条斑紫菜栽培业是江苏省海水增养殖的支柱产业。目前 ,省内栽培区紫菜的种质性状退化和品种混乱现象日趋严重 ,不仅影响了产业的经济效益 ,还给加工、贸易和其它相关产业的发展带来严重影响。因此 ,解决条斑紫菜的种质问题显得十分迫切。条斑紫菜种质污染的发生 ,会干扰良种的研究和推广 ,甚至导致优良种质丢失。为此 , 笔者进行了条斑紫菜种质制备、保存、扩增防污染的专门研究 ,以有效控制种质污染 ,为促进条斑紫菜良种化栽培奠定技术基础。现将条斑紫菜种质防污染技术介绍如下。

　　1.条斑紫菜种质制备过程中的防污染技术

　　1. 1挑选的紫菜应藻体完整,无畸形 ,无病斑 ,无难以去除的附着物 ,表面具光泽;野生藻株体大于15 cm ,栽培藻株体大于 25 cm。藻株用保鲜袋包装好运回实验室中。

　　1. 2操作室、制种间做好清洁工作 ,支架、台面用福尔马林擦拭或用紫外灯消毒 ,工具、用具用酒精擦洗或高温蒸煮再或烘箱干燥; 培养用海水在100℃下蒸煮 10 m in,阻绝一切污染源。

　　1. 3在制种间 ,用毛笔在消毒海水中反复刷洗藻株 ,用灭菌滤纸吸干其水分 ,包于滤纸内 ,再用保鲜袋包好 ,在 - 20℃低温冰箱中处理 15 d;或从刷洗干净的藻株中切取组织片 2 cm ×2 cm , 在含1%的柠檬酸溶液中震荡冲洗 2 m in,再用消毒海水冲洗 ,去污杀菌 ,然后将组织片切成 0. 5 cm ×0. 5 cm 的小片 ,放于 60 mL 的广口瓶内 ,加 PES 培养液 ,并在培养液中添加青霉素、链霉素各 30 万 IU /L , GeO2 3 mg/L,在光照培养箱中培养。培养过程中严防一切人为或环境污染 ,发现污染瓶立即丢弃 ,并防止交叉感染。培养 40～60 d,出现小藻落即为种质形成。

　　2.条斑紫菜种质保存中的防污染技术

　　在条斑紫菜的种质保存中 ,发生污染的途径有 3个: ( 1)制种时本身潜在的污染; ( 2 )种质保存时受到环境的污染; ( 3 ) 保存过程中的操作产生污染。若在保存中发生严重污染 ,可能造成无可重现的种质丢失 ,因此 ,保存中防治污染显得尤其重要 ,必须做到如下几点。

　　2. 1必须设有专门的种质保存室 ,专门的保存箱 , 且均为非敞开式 ,置放种质的保存支架和保存管全部要消毒 ,且保存工作要有专业技术人员专职管理。

　　2. 2从已制备的种质小藻落中 ,挑选目视无污染的种质进行分离纯化。在无菌操作台内 ,将无污染小藻落分装到 3 ～5 支保存管内 ,用 PES培养液在光照培养箱中培养 20 ～30 d,将目视无污染的藻球制成液相、固相 ,保存管加盖 ,并用封口胶密封 ,在低温弱光下保存。

　　2. 3在种质保存中 ,目视有污染发生 ,如果原制种量充足 ,则直接丢弃 ,再从制备中补充;若不充足 , 一般采取以下方法处理:硅藻污染用 9 ～13 mg/LGeO2处理 10 d,调换保存液; 若是微型蓝藻和绿藻污染,取出种质 ,用消毒海水冲洗 ,在无菌操作台内挑选污染轻的藻球重置于保存管内 ,用黑薄膜纸包裹 ,使种质处于黑暗状态 ,置于种质保存箱底部保存 2个月 ,再用消毒海水冲洗藻球 ,重新保存;出现霉菌污染 ,可直接在保存液中加青霉素、链霉素各 30 万 IU /L ,一周内更换保存液重新保存。

　　4污染严重时 , 采用上述处理方法很难奏效。此时应将种质接种于贝壳上 ,出现藻落后用刀片刮取 , 再用消毒海水冲洗,将藻落置于广口瓶中培养。当出现无污染的藻球后 ,进行分离纯化 ,重新进入保存程序。这种方法虽然操作繁杂 ,周期长 ,却是最为彻底的去污方法。

　　3.条斑紫菜种质扩增中的防污染技术

　　进行条斑紫菜种质扩增 ,是为科研和生产提供种质材料 ,要求种质品种多、数量大 ,且操作步骤多 ,培养周期长 ,且不可能在完全封闭的状态下进行 ,所以容易发生污染。一旦污染发生 ,达不到扩增的目的 ,良种就无法推广,研究无法进行。因此 ,扩增要防治结合 ,做好以下几点。

　　2.1设立专门的非敞开式的扩增室和培养箱 ,并由专人管理 ,非工作人员不得入内。用日光灯和自然光调节光强 ,将光强控制在 1000 ～2500 lx, 用空调将温度控制在 20 ±2℃, 充气通过 1%CuSO4 过滤。

　　3. 2扩增培养时利用生物的优势生长逐级展开培养 , 在 60 mL→250 mL→500 mL→1000 mL→5000mL的容器中封闭培养。

　　3. 3所用工具、用具、器具等均须高温蒸煮或烘箱灭菌 ,且不挪作他用。用完后清洗消毒妥善保管 , 不能接触污物、油污及其他动植物。培养用海水从无污染海区提取 ,经黑暗沉淀过滤 ,高温消毒。

　　3. 4一般扩增开始 ,控制光强在 500  lx以下。通常一周后 ,当种质切割后恢复正常生长 ,逐渐将光强提高到 2000 lx左右 , 营养盐每周加 5 mg/L。若出现污染 ,则将光强控制在 1000 lx以下,营养盐减半甚至暂停 ,防止杂藻乘虚而入。

　　3. 5出现硅藻污染 ,采用 9～15 GeO2处理 96 h,反复多次 , 以去除硅藻 , 或在培养液中加 GeO2 3 mg/L并保持 ,直至硅藻消失; 当蓝绿藻污染出现时 ,用 NH4 HCO3 100 mg/L 处理 48 h,使大量的微藻细胞破碎 ,冲洗种质 ,更换培养液。静置培养一周后 ,加营养盐恢复正常扩增培养。